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孫正義もやらないし自分で自宅でDIY新型コロナPCRをしよう(3)PCR反応がうまくいっているかの確認

ここまで新型コロナウイルスをRT-PCR法で検出するための5ステップの概略を説明しました。

• 孫正義もやらないし自分で自宅で新型コロナ検査をしよう(1)方法の概略と必要な試薬・装置〜RNA抽出 /バイオハッカー・ジャパン 2 users14イイネ

• 孫正義もやらないし自分で自宅で新型コロナ検査をしよう(2)ウイルスRNAの逆転写とPCR。研究試薬個人輸入時のコツ /バイオハッカー・ジャパン 5 users6イイネ

の5ステップで進めるのですが、こういった遺伝子実験がうまくいっているかどうかの確認にはコツがあります。なぜならDNAって全く見えないので、実験が終了するまでうまくいっているかを確認する方法が無いのです。

ですのでこれから
ステップ1.(5)の工程がうまくいっていることを確認
↓
ステップ2.(4)→(5)の工程がうまくいっていることを確認
↓
ステップ3.(3)→(4)→(5)の工程がうまくいっていることを確認
↓
ステップ4.(2)→(3)→(4)→(5)の工程がうまくいっていることを確認
↓
ステップ5.(1)→(2)→(3)→(4)→(5)の工程がうまくいっていることを確認
↓
大成功

というステップで進みます。(5)がうまくいくことは確認済みです。

• DIYバイオに最適かも。トランスイルミネーターなんて使わなくても電気泳動後のDNAを観察可能だった /バイオハッカー・ジャパン2イイネ

そこで次にステップ2を行います。具体的には(4)の工程であるPCRがうまくいくことを確認します。DNAサンプルとしては適当に自分の血液か、口の内側の皮膚を綿棒でぐりぐりでもして剥がれ落ちたカスでも使おうと思います。血液の採取は
↓ここで紹介した尿酸値、血糖値DIY測定キットについている「ランセット」って道具で簡単に取れるのでそれを使います。

• 痛風コワいっす！自分で尿酸値をこまめに測定して改善する計画 /バイオハッカー・ジャパン3イイネ

100円ショップで針でも買ってきて、火であぶって指に突き刺しても良いです。
血液や皮膚からDNAを抽出するには、エタノールなど色々な薬局で使える試薬を使って完全DIYでやっても出来るはずですが、下記の抽出キットが100回分で124ドル。送料入れても、1回あたり150円ほどですので今回はキットを使って行います。

• AccuPrep? Genomic DNA Extraction Kit (100 reactions)（BIONEER)

キットの購入は韓国からの海外通販です。日本はオウム真理教事件とか理由に試薬メーカーも、代理店も研究用試薬をいっさい個人に売ってくれない理科教育崩壊国家なので、海外通販に頼る必要があります。ほんと国内のそういう会社、コロナ騒ぎで全部潰れればいいのに。やつら一般市民が自分でPCRを行う機会を奪って社会に害をなしているわけだし。
↓箱です。


↓中身。液体試薬が5種類、使い捨てプラグッズが3種類×100個。あと凍結乾燥試薬。


↓凍結乾燥されている試薬はProteinase Kです。タンパク質分解酵素です。4本に分かれているので1本で25回分です。水に溶かした後は凍結保存可能なはず。


↓やり方の説明はシートに簡単に書かれています。


ななめ読みすると、血液なり、皮膚なりの生体サンプルにProteinase Kを加えて60度10分でタンパク質部分を分解し、エタノールを入れてDNAを析出させる。吸着カラムにかけてDNA以外を洗い流した後にDNAのみを回収して、水に再溶解させる。という工程のようです。

DNA抽出に「吸着カラム」使ってますが、この過程で13000g×1分とかの遠心がありますね。そんな高速回転の遠心分離は我が家では出来ないのですが低速×長時間で代用できますかね？

あ、この前1500円で買った遠心機は4500gまでの回転数ですが、Bento Labは13500gまで高速回転出来ますね。

• アーテックの卓上遠心分離機が安くてスゴク使える！4000rpm、550×gまでOK /バイオハッカー・ジャパン 1 users1イイネ

• 自宅でのDIYバイオに最適なオールインワン実験装置「Bento Lab」がついに届いた！！！！PCR装置、電気泳動槽、トランスイルミネーター、遠心機完備 /バイオハッカー・ジャパン 1 users8イイネ

吸着カラムを使わずに普通に遠心してペレットにする方法でもDNAを抽出出来そうな気もします。

PCRに使うマスターミックスは以前購入したもの↓を使います。

• 米国EDVOTEK社の通販は日本でDIYバイオをするのに最強！！安価にDNA抽出試薬とPCRマスターミックスを購入 /バイオハッカー・ジャパン 1 users3イイネ

BIONEERでも安価に買えます。
↓PCRに使うプライマーは何でも良いのですが、Y染色体とX染色体を検出する4本を準備しました。

この4本を使い

• XとYが両方検出→男
• Xのみが検出→女
• 両方検出されない→PCR失敗

という判別を行います。
この前、彼女の部屋に遊びに行った時に明らかに俺の髪質とは違う髪の毛を見つけて浮気を疑っているので、その髪の毛を調べて別の男を連れ込んでいるかどうか調べるのにも使おうかと思います（※作り話）。

今回購入したプライマーの配列は下記の記事で紹介していたものです。

• 浮気よ！！！PCRで「髪の毛」「血痕」から男女を判別するために必要なプライマー配列 /バイオハッカー・ジャパン5イイネ

Category:DIY自己医療

　Keyword:電気泳動/63

※当サイトで実施している実験において使用している試薬・機器は全て一般の人が購入・入手可能なものです。入手方法は過去に紹介されているはずですが、見つけられない場合はコメント欄等でお問合せください。

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コメント

いいっすね！=1923
001 [04/09 18:56]妖精:妖精だったら相談センターに「妖精です。」って電話するのか？ ↑(204)
002 [04/09 18:57]コロナコーヒーいやコロンビアか@Biglobe:感染検査して分かってどーすんの？皆な感染してるんだから。抗体があるかどうか調べたほうが実用的。 ↑(211)
003 [04/09 19:00]ふぇちゅいん(管理人) TW★74:>>002 どうぞ http://amrit-lab.com/c/AM824.html ↑(153)
004 [04/09 19:47]ふぇちゅいんさんふぁん(ゆるりゆラリー)★81:>>002 みんな感染してるってホントなの！？ ↑(156)
005 [04/09 20:18]ななしさそ★52:暫く都市伝説がはびこりますねー♪ それはともかく、結果はよ。ｗ ↑(159)
006 [04/09 20:27]ふぇちゅいん(管理人) TW★74:タイトルは「１００日後に新型コロナ妖精が発覚するオトコ」にすれば良かったか？ｗ ↑(160)
007 [04/09 22:08]う@Plala:コロナのプライマーはどうやって入手するの？ ↑(137)
008 [04/10 02:41]コロナコーヒーいやコロンビアか@Biglobe:今日熱出そうな頭痛だったけど。あっー身体やべぇなと思ってアイス2コとポテチとコーラーとカレー大盛りとプロテイン飲んだら治った。食べるって大事やな。(食い過ぎて？下痢したけどw) ↑(163)
009 [04/10 08:58]鳥取県@Dion:コロナ杯決勝進出！スタバは杯に続き二冠なるか！ ↑(165)
010 [04/10 17:12]ふぇちゅいん(管理人) TW★74:>>007 記事に書いてるBIONEERで売ってるんじゃん ↑(150)